登革病毒核酸检测试剂的注册审评思考

□ 韩昭昭

登革热是由登革病毒（Dengue Virus，DV）引起的一种急性传染病，广泛流行于全球热带及亚热带地区，且多在城市和半城市地区流行，通常由蚊媒传播。近几十年来，全球登革热发病率大幅度增长。根据世界卫生组织（WHO）官方数据，2017～2018年，登革热病例数量有所下降，而2019年病例数又急剧增加，其中我国的病例数也显著增加。

登革病毒核酸检测是早期诊断重要手段

登革病毒感染可表现为无症状隐性感染、非重症感染及重症感染等。典型的登革热病程分为三期，即急性发热期、极期和恢复期。

登革病毒属黄病毒科黄病毒属，为RNA病毒，基因组由单股正链RNA组成，共有4个血清型（DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4），4种血清型均可引起登革热感染和流行，其中，DENV-2型传播最广泛。这4种血清型在基因组序列上有65%～70%的同源性，若感染其中一型，身体将产生针对该血清型的保护；但若又感染异型血清型，会增加发生重症登革热的风险。登革病毒与乙脑病毒和西尼罗病毒有部分抗原相同。

登革病毒感染的常用实验室检测包括血常规检查、血生化检查、病原学和血清学检查等。其中，登革病毒核酸检测是登革热病原学检测的重要参考。

早在2009年，WHO就将病毒分离、NS1抗原检测和核酸检测3种方法列为登革病毒感染的早期检测手段，2017年将登革病毒核酸检测列为对疑似急性感染期患者血清样本检测的首要推荐方法。我国《登革热诊疗指南》明确，患者急性发热期可采用登革病毒核酸检测进行早期诊断。我国卫生行业标准《登革热诊断》也将登革病毒RNA检测列入登革热病原学检测方法，用于登革热的早期诊断。

登革病毒核酸检测试剂上市产品有限

目前，全球仅有少数几家公司生产的登革病毒核酸检测试剂获批上市。在美国，美国疾控中心的CDC DENV-1-4 Real-Time RT-PCR Assay已获FDA批准上市。另外，马来西亚、新加坡等部分登革热流行区域国家和地区，也有相关检测试剂获批上市。在我国，中山大学达安基因股份有限公司生产的“登革病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）”已获批上市。

关注预期用途、分析性能及临床试验

对登革病毒核酸检测试剂进行技术审评，需要从产品预期用途的声称、产品分析性能和临床试验等方面考虑。

预期用途的声称 与其他病原体检测试剂相似，此类产品应明确检测样本类型（血清和/或血浆）、预期人群（如曾前往登革热流行区、有高热等临床表现的疑似人群）。同时，需要明确可检出的登革病毒型别及是否可以进行分型检测。

分析性能评估 由于登革病毒核酸检测主要用于急性期感染患者（<5天）的早期诊断，且登革病毒感染的及时诊断是应对登革热疫情的重要手段之一，因此需采用对已知浓度登革病毒液进行系列梯度稀释的方法，准确建立检测试剂的分析灵敏度，并采用1～4型4种登革病毒亚型病毒株进行最低检出限验证。

由于登革热的流行病区分布、临床表现等，与其他虫媒疾病，如基孔肯雅热、寨卡病毒病、黄热病较易混淆，因此临床上需要进行登革热与上述疾病的鉴别区分。对于登革病毒检测试剂，应在特异性研究中，对黄热病病毒、森林脑炎病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、乙型肝炎病毒等进行交叉反应性研究，证明检测试剂具有可特异检出登革病毒的能力。对于登革病毒分型检测试剂，还应对不同型别之间的特异性检出能力进行额外研究。

临床试验 考虑到目前已上市同类检测试剂较少，临床试验可以选择与已上市产品或核酸序列测定方法进行比较研究。若采用测序方法进行性能验证，应至少包含对检测试剂最低检出限的评价。

为保证临床试验包含一定数量的阳性样本，临床试验应以发热疑似登革热患者作为研究对象，入组样本注意与预期人群相一致。

目前，登革热/重症登革热没有特异治疗办法，但及早发现和适宜的医护可将死亡率降到1%以下。可以说，登革热患者良好的临床结局，很大程度上依赖于对登革热疾病准确的早期诊断。作为登革病毒感染早期辅助诊断的主要手段之一，登革病毒核酸检测应具备良好的特异性和灵敏度。产品的研发与验证应充分合理，并注意在说明书中注明产品的主要性能、预期人群及使用局限性，以更好地指导临床使用。

（作者单位：国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心）