【ICH基础知识500问】S3A 毒代动力学毒性研究中全身暴露的评估（下）

问 近年来，微量采样技术广泛应用于毒代动力学（TK）评价，微量采样的定义是什么？

答 微量采样是采集极少量血液（通常≤50μl）的一种方法，通常用于测定药物和（或）其他代谢物的浓度以及后续计算合适的毒代动力学参数。

问 微量采样有哪些优势？

答 第一，极少量的血液采集可以减少动物的痛苦，同时提高啮齿类和非啮齿类动物的福利。第二，微量采样法可以在主研究动物的TK评价中消除使用TK卫星组所需动物数。第三，微量采样可在相同动物中直接评价安全性数据与药物暴露量间的关系。

问 哪些类型的药物研究和安全性研究中可以采用微量采样？

答 总体上讲，微量采样适用于绝大多数药物，包括生物制品的研究。微量采样可以应用在所有类型的毒理学试验中。使用微量采样法时，允许从有代表性的亚组中采样。当药物浓度较低并且大多数或全部样本的药物浓度低于分析方法的定量下限（BLQ）时（如局部或吸入给药后的暴露量），不应使用微量采样。然而，当微量采样与传统采样量的生物分析方法的最低定量下限（LLOQ）相同时，即使大多数或所有样本低于生物分析方法的定量下限，仍然可以采用微量采样。

问 毒代动力学研究中应用微量采样，应考虑哪些因素？

答 为了适当地采用微量采样技术，应开发并验证一种生物分析方法，以确保分析结果的可靠性。应对分析特征进行仔细评价，例如LLOQ、准确度、精密度、保存前稀释基质的影响以及生物基质中的分析物在整个采样期内的稳定性、储存和处理条件，以便确立微量采样方法。如果一些研究中已使用传统方法，拟定在其他研究中采用微量采样法时，可能需要比较微量采样与传统采样方法在特定基质中暴露量的测定。如果TK样本呈现状态有本质不同，这种比较就显得尤为重要。

问 微量采样法如何收集血液？

答 血液可采用毛细管或任何适当的小型采集设备，从尾静脉、隐静脉中采集。采集的血液及其来源的血浆或血清可在液体或干燥形式下测定药物浓度；也可以采取干燥样本取样法，通常将样本直接点在纤维素材料或其他类型的材料上，随后干燥。可以使用卡片/设备上固定直径的冲压印或全量的斑点来进行提取和分析。

问 如何评价血液采集对主研究组毒性数据和动物福利的影响？

答 当对主研究动物进行血液采集时，重要的是考虑血液采集对动物生理状况的影响。由于频繁采集血液可能会影响生理数据，如血液学参数，因此即使采用微量采样也应合理制定采样方案。应谨慎记录相关动物数据，如体重、摄食量、血液学参数的变化以及对血液采集部位的任何影响（如组织损伤、炎症）。如果既往研究表明频繁采血会加剧受试药物相关血液学参数的变化，或者怀疑受试药物的药理学作用会诱导此类影响，则需考虑使用卫星组动物进行TK评价。若有科学论证，也可以考虑联合应用稀疏采样和微量采样。

问 在液体或干燥样本的生物分析方法开发和验证中应考虑的因素有哪些？

答 对于液体样本采集，应考虑七点。第一，确保样本均一性；第二，小体积处理（如储存和后续冷冻/解冻过程中的潜在冷冻/干燥的影响）；第三，因样本体积有限，LLOQ可能提高；第四，向小容器/毛细管中加入抗凝剂会导致样本稀释；第五，分析物吸附至收集容器的量可能增加（即表面积与体积的比率增加）；第六，将样本置于适当保存条件下；第七，使用某些方法存在污染的风险和重复取样困难。

对于干燥取样技术，选择具有足够的、可重复的回收率且对检测药物基质干扰最小的方法是很重要的。如果采用干斑冲压法，确保分析物的检测不受不同红细胞压积值的影响非常重要。通过评价来自一个斑点的多个样本分析物水平或通过评价放射性同位素标记来确认斑点的均一性也同样重要。

（摘编自《ICH基础知识500问》，中国医药科技出版社出版）